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FireFlyFluo萤光素酶报告基因检测系统是一种辉光型定量检测试剂盒，具有高灵敏度和发光信号稳定的特点，可以满足高通量检测萤光素酶在哺乳动物细胞中的表达。相对于我司闪光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit (LA11033)，本品FireFlyFluo Luciferase Reporter Assay Kit(LA11034)具有以下优点：采用了一种全新的萤光素酶检测底物，提高了发光信号的稳定性，近乎2小时的信号半衰期为实验设计提供了更大的灵活性；采用加样-混匀-检测的操作方法，无需依赖自动进样器，并且无需弃培养液、离心等步骤，简化了实验流程；本试剂盒组分做了大量优化，与传统闪光型产品相比，无明显刺激性气味。FireFlyFluo萤光素酶报告基因检测试剂盒可用于多种常用细胞培养液：RPMI1640、DMEM、MEM-α、F12、DMEM/F12等，其半衰期均为2小时左右(22℃)，满足绝大多数高通量实验需求。

• 检测仪器选择：能够检测化学发光的仪器都适用本试剂盒的检测，但是针对相同的样品，不同检测器本底信号值和测量值均可能不同；且对于同一样本检测，不同仪器的数值不可横向比较。为防止孔间干扰，推荐使用不透明白色细胞培养板。
  
• 由于发光信号会受到检测环境如培养基组分、温度等影响，所以应确保同组内不同样本检测条件一致。
  
• 酶促反应对温度较为敏感，加样检测前务必将检测试剂以及细胞培养板平衡至室温。
  
• 为保证萤光素酶检测试剂稳定性，适量分装后建议-70℃长期避光保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用，尽量避免多次反复冻融。
  
• 如需同时检测多个细胞培养板，请尽量确保每个细胞板加入检测溶液后孵育时间一致，再进行数据读取，以此获得最佳的检测结果。

• 自备材料
  PBS；多道排枪；白色不透光细胞培养板；化学发光仪或酶标仪。
  
• 检测前准备
  
  • 首次使用时将FireFlyFluo Luciferase Reaction Buffer一次性全部倒入FireFlyFluo LuciferaseSubstrate瓶中，充分混匀后，按使用需求进行分装，建议-70℃长期保存或者短期存放于-20℃不超过一个月，并尽快使用。
    
  • 每次实验前将分装后冻存的检测试剂平衡至室温。
• 操作方法
  
  • 从细胞培养箱中取出细胞培养板，放置5～15min，恢复至室温。
    注：使用白色不透光的细胞培养板，减少孔间的信号干扰。
    
  • 加入检测溶液使用多道排枪向每个细胞孔中加入平衡至室温的含有底物的FireFlyFluo Luciferase Reaction Buffer，加样体积与细胞培养液体积相同。例如，96孔板通常加入80～100μL培养液，相应加入80μL～100μL检测溶液；
    384孔板通常加入20～30μL培养液，相应加入20～30μL检测溶液。
    
  • 振荡混匀为了使得细胞裂解充分，建议将细胞培养板放在振荡混匀仪或附带振板功能的仪器上，室温条件下，采用中高速振板5～10min。
    注：建议振板混匀时间为5～10min，可根据细胞量进行适当调整，确保细胞充分裂解，得到稳定的发光检测结果。
    
  • 检测
    振板混匀后于化学发光仪或酶标仪中检测Firefly Luciferase报告基因活性。
    注：为得到最佳检测结果，请在加入检测试剂后2小时内完成检测。